RIPA 即Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的细胞组织快速裂解液。AboRo的RIPA 裂解液裂解所得的蛋白样品可以用于常规的Western 等实验。主要成分是：50mMTris(pH 7.6)，150mM NaCl，1% TritonX-100，0.5% sodiumdeoxycholate，0.1% SDS 等多种裂解剂和抑制剂，能有效地抑制蛋白降解。

使用方法

1. 取适当量的NCM RIPA Buffer 裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。

注意：NCM RIPA Buffer 不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶，磷酸酶等抑制剂。

2. 样品前处理

（a）对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6 孔板每孔加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2 秒后，细胞就会被裂解，然后转移至离心管中。

（b）对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6 孔板每孔细胞加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100 万细胞/管，然后再裂解。

（c）对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片，按照每20mg 组织加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) ,用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

3. 上述样品转移至冰上，裂解30 分钟，中间15 分钟后补加一次终浓度1mM PMSF。充分裂解后，10000-14000g离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

注意事项

1.RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA 等的复合物。在不检测和基因组DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NFκB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

2．为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

3．PMSF 应现用现加,需自备PMSF，或者可以蛋白酶抑制剂混合物。

4．裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

5．蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。4℃保存，室温运输，一年有效。