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KEIris RT mix with dsDNase(All-in-One)是将 RNA 合成cDNA 的一个操作更为简便的系统,含有第一链 cDNA 合成所需的全部试剂,仅需加入 RNA 模板和水即可进行逆转录反应,操作非常方便。使用该逆转录预混液 15 分钟内最长可获得12 kb 大小的cDNA。合成的cDNA 推荐用于qPCR 反应。该预混液采用特制的高效 dsDNase,该酶具有热敏感性, 可在高温条件下快速不可逆地失活,因此仅需一次加样,即可同管进行去除基因组 DNA 污染与逆转录反应,与使用DNase I 去除基因组 DNA 污染相比,无需额外加入 EDTA 进行失活,不仅减少了对 RNA 模板的损伤、降低 RNase 污染风险,而且节省实验时间。
1. RNA 模板的纯度和完整性是影响逆转录效果的重要因素, 如模板中含有蛋白、EDTA、酚等杂质会使 RNA 降解。
2. 若后续实验为 qPCR,逆转录产物的加量应不超过 PCR 体系终体积的 1/10,如 20 μL 的 PCR 反应体系,逆转录产物的加量应不超过 2 μL。
3. 预混液中已经包含 Oligo(dT)20VN 和随机引物,不仅适用于包含 Poly(A) 结构的真核生物 mRNA,也适用于不含Poly(A)结构的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不适用于 miRNA 等小 RNA 模板。