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ECL 超敏化学发光液,主要用于检测 HRP(辣根过氧化物酶)标记的目的条带,检测灵敏度最高可达飞克(fg)级。该发光液优化了底物的成分,应用了新型的 Enhancer 和氧化剂,发光强度更高,稳定性更好,不含有毒试剂,安全性更高。
1. 准备工作稀释液,将 ECL 超敏化学发光液 Ultra Luminol/Enhancer Reagent (A) 和 Stabilized Peroxide Reagent (B) 按体积比例 1:1 混合;
注:为了获得最佳效果,使用前准备稀释液并立即使用。吸取 ECL 超敏化学发光液不同组份时要换移液管,以免污染试剂。
2. 从 TBST 或 PBST 缓冲液的托盘中取出膜,小心移去膜上的多余缓冲液,但不要让膜干燥。
3. 将膜上有蛋白的一面朝上平整地铺在一张纸板上,加上配好的工作稀释液。用量以覆盖膜为基准, 1ml 工作液可以覆盖大约 10cm2 的膜。
4. 将膜与工作稀释液孵育 1-5min,以确保整个表面覆盖。
5. 通过放射自显影胶片或成像设备获取信号。对于一个未知的信号,可调节不同曝光的时间来获得最佳结果。